Lihlahisoa

Letsoai la Tris acetate hangata le sebelisoa ho lokiseng bafa ea TAE (Tris-acetate-EDTA), e sebelisoang e le sekontiri se mathang le li-gels tsa agarose.Tris Acetate-EDTA buffer e sebelisoa bakeng sa DNA agarose gel electrophoresis empa e boetse e sebelisetsoa RNA agarose gel electrophoresis e se nang denaturing.DNA e nang le mefuta e 'meli e atisa ho sebetsa ka potlako ho TAE ho feta li-buffers tse ling' me e ka 'na ea khathala nakong ea electrophoresis e atolositsoeng.Ho potoloha ha buffer kapa buffer replacement nakong ea electrophoresis e atolositsoeng ho ka lokisa matla a tlase a buffering.E ka sebelisoa libakeng tse fapaneng ho ithuta ho tsamaea ha DNA tharollong.Kaha borate ho TBE buffer (Tris-Borate-EDTA Buffer, 10X Powder Pack, sc-296651) ke inhibitor e matla bakeng sa li-enzyme tse ngata, TAE buffer e buelloa ha u sheba lits'ebetso tsa enzymatic bakeng sa sampole ea DNA.Letsoai la Tris acetate hape ke sekoaelo se nang le kutlo e phahameng litekong tsa ATP tse nang le li-firefly luciferase.

Lisebelisoa: TAE running buffer ke buffer e sebelisoang haholo bakeng sa DNA agarose gel electrophoresis, hape e sebelisetsoa RNA agarose gel electrophoresis.DNA e nang le mefuta e 'meli e atisa ho tsamaea ka potlako ho TAE ho feta li-buffers tse ling, empa hape e hlōleha ho sesa ka lebaka la ho fokotseha ha li-ion tsa buffer nakong ea nako e telele ea electrophoresis.Ho palama baesekele ea buffer kapa phapanyetsano ea buffer nakong ea electrophoresis e telele e ka lefella bokhoni bo tlase ba buffer.2 Hlakola sekoaelo sa TAE se koalehileng ho fumana 1 mMTAE buffer e nang le 40 mM Tris acetate le 1 mM EDTA, pH 8.3.1 mMTAE buffer e ka sebelisoa ka bobeli ho li-gels tsa agarose le joalo ka buffer e sebetsang.Bakeng sa tharollo e phahameng, ho kgothaletswa hore motlakase o sebelisitsoeng o be tlase ho 5V / cm (sebaka se pakeng tsa li-electrode tsa unit).

Kopo: TAE running buffer ke buffer e sebelisoang haholo bakeng sa DNA agarose gel electrophoresis ho Chemicalbook gel, mme e boetse e sebelisoa bakeng sa RNA agarose gel electrophoresis e seng denaturing.DNA e nang le mefuta e 'meli e atisa ho tsamaea ka potlako ho TAE ho feta li-buffers tse ling, empa hape e hlōleha ho sesa ka lebaka la ho fokotseha ha li-ion tsa buffer nakong ea nako e telele ea electrophoresis.Ho palama baesekele ea buffer kapa phapanyetsano ea buffer nakong ea electrophoresis e telele e ka lefella bokhoni bo tlase ba buffer.Theko ea TAE e tsepamisitsoeng e ile ea hlapolloa ho fumana 1 mMTAE buffer e nang le 40 mM Tris acetate le 1 mM EDTA, pH 8.3.1 mMTAE buffer e ka sebelisoa ka bobeli ho li-gels tsa agarose le joalo ka buffer e sebetsang.Bakeng sa tharollo e phahameng, ho kgothaletswa hore motlakase o sebelisitsoeng o be tlase ho 5V / cm (sebaka se pakeng tsa li-electrode tsa unit).

Lisebelisoa: Ha ho fumanoa ATP e nang le li-firefly luciferase, sehlahisoa sena ke tšireletso e thata ka ho fetisisa;phumano e tlamang ya glutamate.

Tlamahano e ka tlosoang ea [3H]l-glutamic acid ho lisebelisoa tse sa amoheleheng.

[3H]L-glutamic acid e tlamellang liphaepheng tsa microfuge le likhalase e ile ea fuputsoa ka li-buffer tse 'ne.Setlamo se tlamang lisebelisoa tsena se ne se sa utloahale, empa se ile sa eketsoa ka centrifugation kapa suction ho Tris-HCl le Tris-citrate buffer.Tlamahano ena e ne e fokola haholo kapa Ha HEPES-KOH, kapa Tris-acetate buffer e ne e sebelisoa.[3H]L-glutamate e tlamang ho li-tubes tsa microfuge e ne e thibetsoe ke L- empa eseng D-isomers ea glutamate le aspartate.DL-2-amino-7-phosphonoheptanoic acid le eona ha ea ka ea thibela ho tlama.Lik'hemik'hale tse ling tse bontšitseng thibelo e tlaase ho isa ho e itekanetseng e ne e le: N-methyl-D-aspartate, quisqualate, L-glutamic acid diethyl ester, N-methyl-L-aspartate, kainate, le 2-amino-4 -phosphonobutyrate.Ho tlama ho ne ho thibetsoe ke lera la boko ba rat.Tlamahano e itšetlehileng ka protheine [3H] glutamate e fumanoe ka ho lokisoa ha lera le leqhoa le qhibilihang khafetsa ha ho tlama ho ne ho etsoa buffer ea Tris-acetate.Ho khothalletsoa hore Tris-acetate kapa HEPES -KOH buffer e lokela ho sebelisoa ho glutamate bin ding assay.Haeba Tris-HCl kapa Tris-citrate buffer e sebelisoa, teko e nepahetseng ea taolo e lokela ho etsoa ho lokisa bakeng sa ho tlama li-microfuge tubes kapa li-filters tsa khalase.